飽和油紅O染色液

       飽和油紅O染色液屬于偶氮染料，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類，它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當(dāng)組織切片置人染液時，染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)（如脂滴）中，使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。

一、飽和油紅O染色液的配制

       脂質(zhì)(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑(如乙醇等)。人體的脂肪主要有兩種：1、儲存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、腎、胰腺等部位。2、結(jié)構(gòu)脂肪，如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等)，主要分布于細(xì)胞內(nèi)。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類，呈中性。中性脂肪是儲存能量的方式之一，在氧化時釋放出能量。中性脂肪染色經(jīng)常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹黑B、油紅O法等。傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料，近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色。油紅O是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，較易不甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀，不磷脂結(jié)合力稍差，其染色原理一般認(rèn)為是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的溶解度較原溶劑中的溶解度更大，所以在染色時染料就從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)移入脂質(zhì)而使脂肪染色。

      飽和油紅O染色液(細(xì)胞)簡稱ORO染色液，可顯示小的脂滴，可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料。標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福爾馬林)。脂肪陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定。

1．油紅O 1g

異丙醇 100ml

2．油紅O 足量

異丙醇 100ml

配成油紅O飽和溶液，使用時以油紅O飽和液一份加蒸餾水兩份，過濾后使用。

二、染色程序

1．切片用甲醛―鈣固定10分鐘；

2．蒸餾水洗；

3．60％異丙醇浸洗；

4．1由紅O染液10分鐘(染液可回收再利用)；

5． 60％異丙醇分色至背景五色；

6．蒸餾水洗；

7．Mayer蘇木精復(fù)染；

8．自來水洗(藍(lán)化)1～3分鐘；

9．蒸餾水洗；

10．甘油明膠封片。

結(jié)果：組織細(xì)胞中脂滴呈橘紅色，核呈藍(lán)色。

油紅O脂類染色澄  顯示大鼠脂肪肝中肝細(xì)胞內(nèi)染為紅色大脂

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