更新時間：2024-09-26
外泌體電鏡可以直觀的看到粒子的形態，因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性，但是包括支原體、鐵蛋白聚團、聚乙二醇蛋白聚團、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似，并且電鏡只能展示局部景象。因此，電鏡成像無法區分外泌體及形態相近的納米粒子，且不能反映樣品中的外泌體數量。
1、樣品制備：
收集外泌體樣品：收集細胞培養上清液、生物體液（如血漿、尿液等）或組織液體（如腦脊液等），其中包含外泌體。
預處理：通常需要對樣品進行初步處理，如離心去除細胞碎片和大顆粒物質。
電鏡固定：
固定樣品：使用適當的固定劑（如戊二醛、冷凍固定等）將外泌體固定在其原來的狀態中，以保持其形態和結構。
洗滌：用緩沖液洗滌樣品，以去除過剩的固定劑。
2、脫水和浸透：
脫水：在一系列濃度遞增的乙醇溶液中，逐步將樣品中的水分脫除，以使樣品適應后續的樹脂浸透。
浸透：使用合適的樹脂（如Epon、Araldite等）浸透樣品，使其在固化后具有適合電鏡觀察的硬度和清晰度。
3、樹脂包埋：
預埋：將浸透后的樣品置于埋脂盒中，加入適量的樹脂，并根據需要進行定向。
固化：根據樹脂的不同，采用適當的溫度和時間進行固化，使樣品堅硬并固定在樹脂塊中。
4、超微切片：
準備超薄切片：使用超薄切片機，將樹脂塊切割成約60-90納米厚度的超薄切片。
收集切片：將切片收集在銅或金網格上，以便后續的電鏡觀察。
5、電鏡觀察：
雙重染色：通常首先使用重金屬鹽（如鈾酸和鉛酞）對切片進行雙重染色，以增加對比度。
電鏡觀察：將樣品放置在透射電鏡中，利用電子束通過樣品，觀察外泌體的形態和內部結構。
拍攝圖像：使用透射電子顯微鏡（TEM）或掃描電子顯微鏡（SEM）拍攝外泌體的高分辨率圖像。
外泌體電鏡觀察是一項復雜的技術，需要在專業實驗室中進行。實驗條件和步驟可能會因實驗目的和設備不同而有所變化。為了獲得高質量的觀察結果，建議在進行外泌體電鏡觀察時咨詢專業人士或參考相關文獻。
